目的基因片段與載體連接的過程中,連接酶的最適活性溫度是多少

2023-02-16 11:55

2023-02-16 16:20
數(shù)量一般在 目的基因:載體=5:1-10:1。
雙酶切的話,目的基因多加點(diǎn)沒關(guān)系。目的基因越小,越往10:1上靠;目的基因片段大,反之。
不過現(xiàn)在有很多種連接方法,體系不同,具體你還是要參考連接酶的說明書的。
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連接酶的最佳活性溫度是37℃,但做粘性末端連接時(shí),為了提高連接的效率,常常用較低的溫度,原因在于低溫時(shí)更有利于保持粘性末端的配對,因?yàn)闇囟仍礁?,則粘性末端的互補(bǔ)配對越易于解鏈,從而不利于連接,也就是說,盡管37℃時(shí)連接酶的活性比較高,但高溫同樣會(huì)導(dǎo)致粘性末端配對的破壞,從而減低了連接的效率。
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