T 載體與 目的基因連接成功，測序結(jié)果也正確。從新?lián)u菌，提取質(zhì)粒，在進(jìn)行雙酶切，一直切不下來。

線性化的跑得最慢。 質(zhì)粒酶切后，和沒有酶切的對照相比。應(yīng)該會多出一條帶，這條帶應(yīng)該是跑得最慢的，也就是顯得比原來的更大。酶切的不徹底的話，原來的那幾條帶也可能存在wjswj(站內(nèi)聯(lián)系TA)酶切之前你看...

因為 轉(zhuǎn)化過程你沒出來好 加點(diǎn) kml 再轉(zhuǎn)化 提質(zhì)后 分別切2 這樣就正確了

酶切前,質(zhì)粒電泳圖一般是三條條帶,并認(rèn)為這三條帶從上到下一次是線性、開環(huán)、超螺旋.其實可能會比這條帶更多些,可以認(rèn)為是中間復(fù)合體狀態(tài). 酶切后,因為超螺旋狀態(tài)的質(zhì)粒被切成線性,所以條帶會有一條條帶.如...

這個可能性太多了吧. 這個不好說啊.你得一個條件一個條件的排除

重組質(zhì)粒是把載體質(zhì)粒酶切開，連接上PCR片段，然后轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞，培養(yǎng)后提質(zhì)粒獲得的，這一系列過程中都無法檢測目的基因是否連接成功了，是否轉(zhuǎn)化成功了，只有對轉(zhuǎn)化后的菌再次提質(zhì)粒、酶切檢測或PCR檢測才...

可能是兩個載體互連了,你酶切了跑膠分析一下長度就清楚了. 原因基本跑不了載體互連、多個片段互連,或者根本沒提出來,而是把細(xì)菌基因組給弄出來了,這樣你就要檢查一下提質(zhì)粒的過程,仔細(xì)看一下膠上有沒有條...

可能是兩個載體互連了，你酶切了跑膠分析一下長度就清楚了。 原因基本跑不了載體互連、多個片段互連，或者根本沒提出來，而是把細(xì)菌基因組給弄出來了，這樣你就要檢查一下提質(zhì)粒的過程，仔細(xì)看一下膠上有沒有條帶什...

都有可能 你可以多做幾個對照,如空載體轉(zhuǎn)化、空細(xì)胞涂板等等，幫助縮問題小范圍 你可以詢問實驗室其他人員，看看酶是否有問題，感受態(tài)是否有問題，抗生素是否有問題，等等 按你給的線索，菌落很少，很有可能是切...

很顯然是質(zhì)粒發(fā)生了自連啦。切開的2個質(zhì)粒連起來了，因此相當(dāng)于2個質(zhì)粒的大小。你需采用磷酸化避免自連發(fā)生。

連接產(chǎn)物有:質(zhì)粒和質(zhì)粒連，目的基因和目的基因連，質(zhì)粒和目的基因連. 至于你說的用兩種酶切的產(chǎn)物,需要具體看酶的位置關(guān)系再作判斷,情況就多了