序列連在T載體上,用sacⅡ單酶切之后目的條帶沒有了(t載體有),這是咋回事啊

2022-09-20 16:33

序列兩端都是sacⅡ酶切位點(diǎn)
2個(gè)回答
將原題貼上,話說的不明不白,無法理解
將原題貼上,話說的不明不白,我有點(diǎn)無法理解。如果理論上:用用sacⅡ單酶后能出現(xiàn)你的目的條帶,但實(shí)際上沒有酶切出目的條帶(t載體有),我認(rèn)為原因是T載體自連,你的目的條帶沒有連上!建議重連,并用菌落PCR檢驗(yàn),然后用酶切檢驗(yàn)。
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什么是T載體?T載體分為哪幾類?有什么區(qū)別?
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基因工程中常提到t載體,什么是t載體,t載體有什么作用
1個(gè)回答2022-10-29 12:41
t載體就是T-DNA,是一類可以重組到受體生物染色體上的載體,通常被應(yīng)用于植物的基因重組過程中。
t載體自連
1個(gè)回答2022-12-18 21:16
1確認(rèn)連接體系沒有問題.2 確認(rèn)設(shè)計(jì)引物的時(shí)候兩邊酶切位點(diǎn)的堿基和保護(hù)堿基沒有問題.3 考慮PCR產(chǎn)物回收產(chǎn)物濃度提高一點(diǎn).連T一般很容易的,我也做的單酶切連接,祝成功啦.
T載體是什么?
3個(gè)回答2022-10-10 03:58
一段線性雙鏈DNA載體,載體的兩端3‘末端各有一個(gè)額外的T。因?yàn)榇蟛糠諸aq聚合酶會(huì)在PCR產(chǎn)物3’末端添加一個(gè)額外的A,所以使用T載體可以比較方便且高效(相對(duì)于平末端)進(jìn)行PCR產(chǎn)物的連接反應(yīng),以方...
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2個(gè)回答2022-09-12 00:08
應(yīng)該是分子克隆用的載體,使用前是雙鏈線性片段,上面有必要的測(cè)序或表達(dá)元件,兩頭是黏末端,各在3'有一個(gè)游離的t(故名t載體)。因?yàn)閜cr實(shí)驗(yàn)中用的聚合酶大部分都是taq和taq的同類酶,會(huì)在pcr產(chǎn)物...
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T載體與目的片段大小一致時(shí),怎么酶切回收啊
1個(gè)回答2022-09-11 05:48
兩條帶都收了 然后測(cè)序唄
T載體的作用是什么?克隆時(shí)為什么要用T載體?
1個(gè)回答2022-10-06 04:39
我做過幾個(gè)克隆,沒用過T載體,直接將酶切后純化的產(chǎn)物進(jìn)行連接,照樣可以連接成功,基本上都會(huì)有10-50個(gè)克隆長(zhǎng)出來。我用的是Sal I和Nde I這兩個(gè)酶切位點(diǎn),似乎這兩個(gè)都是平端的哦。
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