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如何根據(jù)一個單位點(diǎn)的突變體,研究一個基因的功能？

2023-02-05 16:10

已經(jīng)得到了突變體，如何繼續(xù)研究這個基因的功能

1個回答

2023-02-05 18:04

以下從植物領(lǐng)域來講：
常規(guī)情況下，獲得突變體后當(dāng)定位克隆控制該性狀的基因。找到突變位點(diǎn)后進(jìn)行一些基本的分子實(shí)驗(yàn)和生信分析：
1）構(gòu)建promoter+gDNA的互補(bǔ)載體，轉(zhuǎn)化突變體，觀察是否互補(bǔ)表型
2）構(gòu)建Actin/Ubiquitin/35S+CDS+標(biāo)簽的載體，轉(zhuǎn)化突變體，觀察目的基因過表達(dá)的表型，同時標(biāo)簽蛋白可用于下游分子實(shí)驗(yàn)
3）構(gòu)建CRISPR/Cas9敲除載體，觀察在目的基因敲除下產(chǎn)生的表型
4）明確基因組織表達(dá)模式，亞細(xì)胞定位情況
5）paralog和ortholog是否有過研究，突變位點(diǎn)保守性如何
6）目的基因編碼何種蛋白，有什么功能，突變位點(diǎn)位于哪個結(jié)構(gòu)域，可能對蛋白功能造成哪些影響

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