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分子克隆獲取目的基因時什么時候用酶切，什么時候用PCR?

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分子克隆獲取目的基因時什么時候用酶切，什么時候用PCR?

2022-09-28 11:36

2個回答
2022-09-28 14:33
一般你要連接的話，就酶切，你要擴增就做pcr
2022-09-28 12:54
連接T-vector之前進行PCR得到帶A的PCR產物，然后進行轉化，對expression vector和質粒進行相同酶切，連接，轉化。在整個clone中有時會用PCR來鑒定，如目的基因是否轉入進感受態(tài)細胞。
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挑克隆鑒定時PCR有目的條帶但是酶切沒有
3個回答2022-09-06 01:47
2中可能，1種是你的抗生素失效了，長出來都是沒質粒的菌；另1種是你轉化進感受態(tài)的都是空質粒。 PCR擴增有目的條帶可能是因為連接產物殘留的PCR片段在平板上引起的假陽性。
酶切后PCR一條帶都沒有 但原質粒PCR有條帶 為什么
2個回答2022-09-04 08:38
什么酶呢？最后酶切組的電泳條帶是彌散，是只有質粒條帶沒有酶切產物條帶，還是干脆就是空白？ 如果是彌散，最有可能的是所用的酶的反應條件要求比較嚴格，因為掌握不當而產生了星號活性，導致把質粒切碎了。建議...
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為什么基因測序前將基因PCR克隆后還要放到大腸桿菌
1個回答2022-12-05 23:10
大腸桿菌是一種載體，要是因為測序的原因，獲得的全長序列要經過測序驗證，而目前的測序技術有限，在序列的起始端準確性不高，所以想要獲得準確的全長序列就需要克隆到載體上。具體可以了解一下測序的原理。
為什么我的目的基因連接克隆載體轉化、提質粒后，酶切鑒定正確，而質粒PCR和菌液PCR鑒定都不正確呢？著急
2個回答2023-01-28 07:00
因為 轉化過程你沒出來好 加點 kml 再轉化 提質后 分別切2 這樣就正確了
我想問一下從PCR開始有帶膠回收雙酶切，載體雙酶切，膠回收后怎么把載體和酶切后的基因連在一起
4個回答2022-11-28 12:12
我們用天根公司的膠回收試劑盒，回收目的基因及載體雙酶切后的產物用于連接，連接體系如下：一般載體1微升，目的基因8微升左右（沒.測OD）,用T4DNA連接酶（購于TaKaRa公司）1微升，再加酶緩沖液（...
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PCR擴增的X基因片段與克隆載體連接
1個回答2022-09-14 15:27
已經得到擴增的目的基因片段和克隆載體→對兩者分別進行酶切（選要相同的限制性內切酶對兩者進行切割）→酶切產物經瓊脂糖凝膠電泳回收→克隆載體和目的基因進行連接（一般選用T4連接酶）→大腸桿菌感受態(tài)細胞的制...
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PCR擴增出目的片段之后為什么要酶切?酶切下來的是目的片段和載體?然后再把它們連起來?很困惑.
1個回答2023-04-27 07:35
應為PCR擴增出來的是混合物,酶切回收后才基本是純的目的片段. 載體一般不用PCR擴增,一般是質粒來源,也需要用切口一致的酶消化回收. 之后連起來就好了
怎樣克隆基因或是克隆基因的一般步驟是什么？
1個回答2022-09-09 10:50
一般情況下有兩種方法：一、反轉錄法：用已知的單鏈mRNA反轉錄出一條單鏈的DNA，再用堿基互補配對原則合成雙鏈DNA。二、用已知的蛋白質的多肽鏈推測出單鏈mRNA（一個氨基酸對應相應的密碼子）上堿基的...
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為什么基因測序前將基因PCR克隆后還要放到大腸桿菌載體上再測序？
4個回答2022-07-12 09:06
補充一個更重要和實際的考慮：實際測序中，可靠的測序結果往往是從引物后二三十個堿基才開始的。如果片段比較長，超過一次測序能力如七八百之外，即使雙向測序也無法獲得引物（排除非特異擴增）或緊鄰引物處的序列時...
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基因克隆不出來，為什么
1個回答2022-09-01 13:52
基因克隆是70年代發(fā)展起來的一項具有革命性的研究技術，可概括為∶分、切、連、轉、選。最終目的在于通過相應技術手段，將目的基因導入寄主細胞，在宿主細胞內目的基因被大量的復制。
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